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本产品用于PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上糖蛋白的检测。整个染色2.5小时完成。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。该试剂盒检测的灵敏度一般可以达到微克级别，但实际灵敏度跟靶蛋白糖基化程度相关，可以用于SDS-PAGE和2D电泳的凝胶检测，也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测（但背景较高），还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。

组分	规格	保存
氧化试剂	2.5g	常温避光
糖蛋白染色试剂	250mL	常温避光
还原试剂	1.25g	常温避光
阳性对照（辣根过氧化物酶）	1mg	-20℃
阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）	1mg	-20℃
5×MonoClolor蛋白上样缓冲液	1mL	-20℃
250mL棕色塑料瓶	2个	常温

按照每次使用25mL糖蛋白染色试剂计算，本产品可以染色8～10块mini-PAGE（8×10cm）胶或印迹膜。

• 配制3%醋酸溶液：将15mL自备的冰醋酸与485mL超纯水混匀，常温保存备用。
  
• 配制50%甲醇溶液：将250mL甲醇与250mL超纯水混匀，常温保存备用。
  
• 配制氧化试剂溶液：将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250mL空塑料瓶中，然后加入250mL的超纯水，充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，常温保存备用。
  
• 配制还原试剂溶液：将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的250mL空塑料瓶中，然后加入250mL的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，常温保存备用。
  
• 配制1×SDS-PAGE上样缓冲液：取0.4mL 5×MonoClolor蛋白上样缓冲液，加入1.6mL超纯水，-20℃贮存备用。
  
• 配制阳性对照（辣根过氧化物酶）溶液：向装有1mg辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入1mL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，所得辣根过氧化物酶溶液的浓度即为1mg/ml，然后适量分装成8～10管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于8×10cm的凝胶来说，每条泳道加10μL的阳性对照溶液即可，上样前95℃处理5分钟。
  
• 配制阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）溶液：向装有1mg大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入1×SDS-PAGE上样缓冲液（自备），所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度即为1mg/ml，然后适量分装成8～10管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于8×10cm的凝胶来说，每条泳道加10μL的阳性对照溶液即可，上样前95℃处理5分钟。
  
• 样品稀释：用5×MonoClolor蛋白上样缓冲液将样品浓度稀释为1mg/ml，SDS-PAGE上样缓冲液终浓度为1×。对于8×10cm的凝胶来说，每条泳道加5～10μL的样品即可，上样前95℃处理5分钟。

凝胶染色的操作步骤，膜染色从步骤3开始，以下步骤仅针对0.75mm厚度大小8×10cm的凝胶，1～1.5mm厚度凝胶或更大体积凝胶适当增加液体体积并延长操作时间。请在通风橱中进行以下操作。

• 固定：取出电泳后的SDS-PAGE凝胶，在50mL 50%甲醇溶液中，摇床慢摇30分钟，弃甲醇溶液。
  
• 漂洗：50mL超纯水洗涤凝胶两次，每次摇床慢摇10分钟，弃超纯水。
  
• 氧化：凝胶中加入25mL氧化试剂，摇床慢摇15分钟，弃溶液。
  
• 漂洗：50mL超纯水洗涤凝胶3次，每次摇床慢摇5分钟，弃溶液。
  
• 染色：凝胶中加入25mL糖蛋白染色试剂，摇床慢摇15分钟，糖蛋白会在5～10分钟内显现品红色。若检测的糖蛋白含量较低，适当延长显色时间。弃染色溶液。若糖蛋白染色试剂中有晶体析出，只需取上清液即可，不要加热溶解晶体。染色步骤会产生有刺激性气味气体，请在通风橱中操作。
  
• 还原：凝胶中加入25mL还原试剂，摇床慢摇15分钟，弃溶液。此时凝胶背景略带红色。
  
• 漂洗：加入50mL 3%醋酸溶液摇床慢摇洗涤胶块3次，每次10分钟，直至胶背景红色变浅，接近淡红色或无色，此时红色糖蛋白主带清晰可见。
  
• 保存：胶块保存在50mL 3%醋酸溶液中。

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